A、关于基质胶应用的常见问题

1.ABW®Matrigengel高浓度基底膜基质用于哪些实验？
ABW®Matrigengel高浓度基底膜基质可进行体内应用研究，如高浓度蛋白可促进肿瘤生长。高浓度蛋白同时可使得
ABW®Matrigengel基底膜基质被注射入小鼠皮下后保持完整，有利于注射的肿瘤细胞和/或血管生成因子保持原位，便
于用于原位分析和/或以后的切除。

2.如何将ABW®Matrigengel基底膜基质用于3D培养？怎样制作3D胶？需要将细胞嵌入到
ABW®Matrigengel基底膜基质中吗？
ABW®Matrigengel基底膜基质可进行体外应用研究，如制备厚层包被用于3D细胞培养。细胞可以内嵌在
ABW®Matrigengel基底膜基质中生长或者直接接种在ABW®Matrigengel基底膜基质表面（覆盖法）生长。

3.什么情况下，需要使用无酚红ABW®Matrigengel基底膜基质？
对于涉及颜色检测的实验，推荐使用无酚红ABW®Matrigengel基底膜基质，如使用荧光染料或Drabkins法计数内皮
细胞成管实验。对于子宫内膜细胞培养，也需使用无酚红ABW®Matrigengel基底膜基质。
此外，酚红和非甾体雌激素结构类似，有类雌激素效应。在实验动物体内具有干扰内分泌和荷尔蒙代谢的能力。

4.如何从ABW®Matrigengel基底膜基质中收获细胞？
推荐使用中性蛋白酶消化或细胞回收方案来收获培养在ABW®Matrigengel基底膜基质中的细胞。
（1）中性蛋白酶消化
中性蛋白酶相比胰酶、胶原酶或其他蛋白水解酶能够更温和有效地获得单细胞悬液，不会损伤细胞或细胞表面蛋白
。对于需要继续接种培养或进行检测的细胞，使用中性蛋白酶不会产生损伤。此外中性蛋白酶也可以用于组织分离。
（2）细胞回收
对于代谢研究和需抽提细胞中RNA时，建议在4℃使用细胞回收解决方案进行非酶消化的细胞收获。因为
ABW®Matrigengel基底膜基质中含有痕量的RNA，进行RNA分析时，应设置一个ABW®Matrigengel基底膜基质（不接
种细胞）的对照组。
（3）其它
降低温度至4℃-6℃使ABW®Matrigengel基底膜基质解聚，以适当转速离心破坏ABW®Matrigengel基底膜基质结构
，获得单细胞悬液。此方法仅适合少部分应用场景。

5.哪些情况应该选用薄胶，哪些情况应该选用厚胶，3D细胞培养有哪些应用？
薄胶主要用于辅助细胞贴壁，有利于细胞增殖；如原代细胞培养，需要一层薄薄的蛋白层辅助，就可以选用薄胶。
厚胶主要用于3D细胞培养；如大鼠主动脉组织分化为毛细血管样结构（RingAssay），以及进行细胞侵袭实验等。
3D细胞培养实验，可以建立起生理上的细胞-细胞与细胞-细胞外基质相互作用，主要是用于研究细胞与细胞间的相
互作用以及更复杂的结构作用，如生物组织等。

6.进行内皮管形成实验，应该选用多大浓度的ABW®Matrigengel基底膜基质呢？
进行该实验，ABW®Matrigengel基底膜基质最低浓度应不低于10mg/mL。

7.做细胞侵袭实验，需要使用多少ABW®Matrigengel基底膜基质进行包被？
进行细胞侵袭实验，以包被24孔板为例，推荐使用每孔0.1mL(浓度200-300μg/mL)的ABW®Matrigengel基底膜基质
（货号为082704）。

8.ABW®Matrigengel基底膜基质的最低成胶浓度是多少？
不同的实验需要不同浓度的ABW®Matrigengel基底膜基质，用户应该根据具体的实验需求确定。
ABW®Matrigengel基底膜基质最低成胶浓度为3mg/mL。稀释时不能简单进行体积倍比稀释，不同批次间的
ABW®Matrigengel基底膜基质浓度有差异，应该根据最终工作浓度(mg/mL)算出需要加入的稀释液体（如PBS或无血
清培养基）的量。用于体内研究的ABW®Matrigengel基底膜基质，为了避免成胶不完全，最终工作浓度不应低于
4mg/mL。

9.ABW®Matrigengel基底膜基质胶块在体内可以维持多长时间？
ABW®Matrigengel基底膜基质胶块可以在体内维持至少一周的时间。

10.ABW®Matrigengel基底膜基质可以诱导ES/iPS细胞分化吗？
可以的，已经有相关论文报道ABW®Matrigengel基底膜基质可以用于ES/iPS细胞的分化研究。

B、关于基质胶操作的常见问题

1.使用ABW®Matrigengel基底膜基质时，需要将移液管、吸头和离心管预冷吗？
是的。因为ABW®Matrigengel基底膜基质在高于10℃的条件下即会开始成胶，我们推荐操作基底膜基质时使用预冷
的移液管、吸头和离心管。

2.ABW®Matrigengel基底膜基质会快速聚合吗？
ABW®Matrigengel基底膜基质在22℃至35℃时会快速聚合成胶。

3.使用ABW®Matrigengel基底膜基质包被过的培养皿可以储存多长时间呢？
包被过的培养皿最好当天使用，具体情况取决于实验目的。需要保存的情况下，可在37°C培养箱中最多存放7天。保
存时ABW®Matrigengel基底膜基质表面需要使用无血清培养基均匀覆盖，保持湿润。

4.怎样稀释ABW®Matrigengel基底膜基质?
使用冰上预冷的无血清培养基或者pH7.4的PBS对ABW®Matrigengel基底膜基质进行适当比例的稀释。

5.应该如何对ABW®Matrigengel基底膜基质进行移液操作?
推荐使用预冷的移液器或者注射器操作，移液管、枪头同样需要预冷。吸液时不要触及瓶子底部；分液时切忌过快、
用力过猛。如果使用移液管分液5mL时，应该吸取6mL，分液到移液管内仍有1mL时即停止；如果使用自动移液器，按压
到第二档位吸液，然后按压到第一档位进行分液。

6.ABW®Matrigengel基底膜基质可以反复冻融吗？
建议用户第一次融化后按照单次用量进行分装，保存。

7.未稀释的ABW®Matrigengel基底膜基质中出现的沉淀应该怎么样处理？
4℃下低速离心，去除沉淀物。

8.未使用完的ABW®Matrigengel基底膜基质应该怎样保存？
与细胞培养基或缓冲液混合过但未使用完的ABW®Matrigengel基底膜基质，不建议保留再用。

9.ABW®Matrigengel基底膜基质可以储存在-70℃吗？
可以。 ABW®Matrigengel基底膜基质可以储存在-70℃。建议客户将整瓶的ABW®Matrigengel基底膜基质进行分装，
储存于聚丙烯或其他可以耐受超低温条件材质的小管中，方便保存和使用。

10.为什么细胞没有贴壁，ABW®Matrigengel基底膜基质也脱落了？
首先，需要检查细胞的接种浓度是否过高， ABW®Matrigengel基底膜基质的用量应等同于细胞培养体系中培养基的用
量。其次，如果ABW®Matrigengel基底膜基质被稀释到过低的浓度，形成的胶体容易从组织培养器皿表面分离。

11.使用ABW®Matrigengel基底膜基质培养的细胞，如果需要进行切片或者免疫组织化学及免疫荧
光检验，该怎样固定呢？如何避免解聚？
可以使用2%浓度的多聚甲醛进行固定。为避免固定后出现解聚的情况，可以加入1%浓度的戊二醛。戊二醛作为固定
剂，常用于电镜观察。如果用户需要进行免疫荧光检验，加入戊二醛后，会出现明显的背景荧光。为了解决这一问题，我
们建议用户在固定之后，使用NaBH4使荧光淬灭。NaBH4极易起泡，进行该步骤时，必须在水平操作台上小心操作，避
免晃动，尽量减少气泡的形成。另外，用户也可以尝试使用较低浓度的戊二醛进行固定，如0.1%到0.5%，浓度越低，背
景荧光信号越少。

C、关于基质胶成分的常见问题

1.为什么我的ABW®Matrigengel基底膜基质很粘稠？
基质胶的蛋白浓度越高，胶体越粘稠。如果浓度高于13.0mg/mL，基质胶会显得非常厚重。
ABW®Matrigengel基底膜基质在未稀释前都会比较粘稠。粘稠的高浓度ABW®Matrigengel基底膜基质可直接使用
，如用于培养肿瘤细胞和/或血管生成因子，注射于小鼠体内后，使细胞保持原位，便于原位分析和/或以后的切除等；
或者稀释后，按照标准浓度的ABW®Matrigengel基底膜基质使用方法使用，具体稀释浓度根据实验需求确定。
除因为产品本身浓度高而粘稠外，基质胶的状态还与运输过程中温度的变化和储藏条件有关。整个运输过程中必须
使用干冰冷藏。如果储藏ABW®Matrigengel基底膜基质的冰箱带有自动除霜功能，冰箱除霜过程中升温，可能使基质胶
成胶。所以，切忌将ABW®Matrigengel基底膜基质储藏于此类冰箱中。为保证ABW®Matrigengel底膜基质的使用效果
，冻融次数应该尽可能减少。拿到新的ABW®Matrigengel基底膜基质后，请按照单次用量进行分装。每次融化操作，
ABW®Matrigengel基底膜基质都应置于冰上。如果ABW®Matrigengel基底膜基质在成胶状态被冻住，再次融化时将不
能成恢复液体状态。

2.为什么ABW®Matrigengel基底膜基质在37°C成胶，而在4°C时却呈液体状态？
ABW®Matrigengel基底膜基质是一种从小鼠骨肉瘤中提取的重组基底膜，新鲜提取的原料中主要包括以下成分：层
粘连蛋白，IV型胶原,巢蛋白，基底膜聚糖、表皮生长因子、类胰岛素生长因子及其他生长因子。这些蛋白构成了
ABW®Matrigengel基底膜基质的基本结构。
在22℃-37℃温度条件下，大分子间的共价键可以结合，促使ABW®Matrigengel基底膜基质形成凝胶。而在低温条
件（如4℃）下，由于没有足够的能量促使共价键结合，所以ABW®Matrigengel基底膜基质呈现液体状态。

3.ABW®Matrigengel基底膜基质中含有DNA和/或RNA吗？
是的。ABW®Matrigengel基底膜基质没有经过DNA酶或RNA酶消化处理，可能会含有痕量的DNA、RNA。

4.ABW®Matrigengel基底膜基质中有血管内皮生长因子（VEGF）和金属蛋白酶（MMPs）吗?
ABW®Matrigengel基底膜基质中含有微量的血管内皮生长因子（VEGF），也可能含有小鼠肿瘤细胞来源的痕量金属
蛋白酶（MMPs）。

5.ABW®Matrigengel基底膜基质中有LDEV吗?
没有的。ABW®Matrigengel基底膜基质经免疫方法及PCR方法检测，并不含有乳酸脱氢酶增高病毒（LDEV）或者乳
酸脱氢酶增生病毒（LDHV）。此外，我们还针对小鼠群体及肿瘤来源筛查了其他种类的病毒，详细信息请参见产品分
析证明书COA。

6.ABW®Matrigengel基底膜基质中有尿素吗？
没有的。在ABW®Matrigengel基底膜基质生产过程中使用了尿素，后续流程中经过透析方法已经去除了。

7.ABW®Matrigengel基底膜基质使用的什么缓冲液？
低葡聚糖DMEM(1g/L)，其中包含50µg/mL庆大霉素。

8.ABW®Matrigengel基底膜基质中含有纤维连接蛋白（Fibronectin）吗？
是的，通过使用WesternBlot检验，我们在ABW®Matrigengel基底膜基质中发现了微量的纤维连接蛋白
(Fibronectin)。

9.ABW®Matrigengel基底膜基质中含有玻连蛋白（Vitronectin）吗？
ABW®Matrigengel基底膜基质是从小鼠肿瘤组织提取的，某些肿瘤组织中可能含有微量的血液，因此
ABW®Matrigengel基底膜基质中可能会有痕量的玻连蛋白（vitronectin）。

10.ABW®Matrigengel基底膜基质中还有什么别的物质？
ABW®Matrigengel基底膜基质中还可能含有浓度小于0.02%的三氯甲烷，以及肿瘤细胞产生的其他未知蛋白或分子。

11.ABW®Matrigengel基底膜基质的生产过程会引起层粘连蛋白变性吗？
不会引起层粘连蛋白变性。

12.ABW®Matrigengel基底膜基质的折射率是多少？
20℃条件下， ABW®Matrigengel基底膜基质的折射率是1.3406到1.3407，相对折射率为1.0056（同等条件下，水的
折射率为1.333）。

13.ABW®Matrigengel基底膜基质会有自发荧光吗？
ABW®Matrigengel基底膜基质是一种蛋白混合物，经过透析处理后溶解在DMEM培养基中。为防止微生物污染，培
养基中添加了庆大霉素。所以ABW®Matrigengel基底膜基质可能引发荧光的组分包括其中的蛋白质成分，维生素成分以
及庆大霉素（氨基糖苷类抗生素）。如果需要使用荧光检测细胞生长状态，建议使用者建立对照实验，在所需要的波长条
件下进行对比，以便排除背景荧光。

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