前言
作为科研“达人”，“蛋白与蛋白的相互作用”这一课题想必大家都很熟悉。研究这一课题的套路很多，这里我们重点聊一聊磁珠在这方面的应用。
磁珠的结构
磁珠是一类具有超顺磁性的磁纳米粒子。所谓超顺磁性，是指磁珠在外磁场的作用下具有弱磁性，容易被吸附，撤去磁场后没有剩磁，容易被分散。 磁珠的结构一般包含磁性的内核（通常为铁的衍生物）、具有良好生物相容性的外壳 以及 外壳上偶联的各种配体（如羧基、氨基等官能团或Protein A/G、抗体等生物大分子）。下图为羧基磁珠示意图。
羧基磁珠示意图
磁珠之所以能在蛋白互作上大显身手，突出的特点就是蛋白荷载量高，特异性强，样品损失小，操作便捷。总之就是简单加方便！ 一般的实验流程如下：
1. 磁珠与样品共同孵育，捕获目的蛋白； 2. 加外磁场吸附磁珠，弃掉上清液； 3. 加入漂洗液漂洗，去掉非特异结合蛋白； 4. 加入洗脱液洗脱，收集目的蛋白。
如何选择磁珠？ 蛋白纯化磁珠常用的配体有Protein A、Protein G、Protein A/G、标签蛋白抗体、链霉亲和素蛋白等。 Protein A/G磁珠是在磁珠表面偶联Protein A/G，而Protein A/G能与IgG相结合，因此可以用来纯化各种抗体。Protein A/G磁珠也可以通过结合不同的抗体，形成“磁珠-抗体-抗原”复合物，从而捕获相应的抗原或互作蛋白。
Protein A/G磁珠工作原理图
相同工作原理的磁珠还有Protein A磁珠和Protein G磁珠。Protein A和Protein G以及Protein A/G在与不同抗体亚型的结合能力上有所差别，选择时可以参照下表。Protein A/G由于是Protein A和Protein G抗体识别区域的重组融合蛋白，因此通常在实验中表现更佳。
YJ001 Protein A磁珠 YJ002 Protein G磁珠 YJ003 Protein A/G磁珠
需要注意的是，Protein A能与抗体Fc端特异性结合，Protein G不仅能与Fc端结合，还能低亲力与Fab端特异性结合。 所以需要纯化抗体Fab端的小伙伴，可以选择Protein A磁珠特异性去除Fc端，这样就可以获得Fab端啦！ 另外，我司还提供一种琼脂糖磁珠，与普通磁珠相比，琼脂糖磁珠的IgG蛋白荷载量更高，更适合用来纯化大量的IgG。
YJ101 Protein A琼脂糖磁珠 YJ102 Protein G琼脂糖磁珠 YJ103 Protein A/G琼脂糖磁珠 根据抗原抗体结合的特异性，研究者将抗体直接与磁珠偶联，获得抗体偶联磁珠，如anti-Flag免疫磁珠、anti-Myc免疫磁珠等，可以用来直接捕获对应的抗原。 与ProteinA/G磁珠相比，抗体偶联磁珠不用考虑抗体种属以及亚型的选择，操作上也少了磁珠和抗体结合的步骤，大大缩短实验时间。目前大部分磁珠偶联的抗体为通用的标签蛋白抗体，包括Flag、HA、Myc、GST、His等，因此更适合用来捕获外源表达的标签融合蛋白。 抗体偶联磁珠工作原理图 YJ005 Anti-HA免疫磁珠 YJ006 Anti-Myc免疫磁珠 YJ007 Anti-Flag免疫磁珠 YJ008 Anti-GST免疫磁珠 YJ009 Anti-His免疫磁珠 YJ010 Anti-GFP免疫磁珠 还有一种常用的磁珠——链霉亲和素磁珠，是将链霉亲和素蛋白（SA）偶联在磁珠上，依靠链霉亲和素和生物素（Biotin）的特异性结合，能捕获被生物素标记的生物大分子，如生物素化蛋白、核酸等。其结合能力比抗原抗体的特异性结合更强。 链霉亲和素磁珠工作原理图 YJ011 链霉亲和素磁珠 常见问题分析 01 用Protein A/G磁珠做免疫沉淀试验（IP）时，没有捕获到目的蛋白？ a、检测体系中目的蛋白是否有表达； b、细胞裂解液需新鲜制备，加入合适的蛋白酶抑制剂； c、IP抗体的质量问题。 02 用标签抗体偶联磁珠做IP，标签应该构建在蛋白的N端还是C端？ 理论上标签不管连在蛋白的N端还是C端都可以，前提是标签蛋白没有被融合蛋白的三维结构包裹起来，以及不影响目的蛋白的生物学功能。 03 在IP过程中出现非特异性条带如何处理？ a、减少磁珠与样品孵育时间； b、增加漂洗次数； c、减少样品总蛋白浓度； d、如果使用的是Protein A/G磁珠，可以先将样品与Protein A/G磁珠（不加抗体）孵育30min进行预清除，去除样品中能和磁珠非特异性结合的杂蛋白。 04 进行Protein A/G磁珠和抗体偶联磁珠的回收时，需要注意哪些问题？ a、非变性洗脱后的磁珠才能进行回收，如低pH洗脱； b、回收的磁珠只适合用来重复纯化同种抗体或者标签蛋白； c、回收的磁珠不建议用来做Co-IP，以免磁珠上残留的蛋白干扰实验结果。 05 Protein A/G磁珠和抗体偶联磁珠回收步骤有哪些？ a、非变性洗脱后的磁珠用低pH洗脱液洗脱3-5次； b、再用PBS洗3-5次； c、保存在PBS溶液中，短期内可以重复使用。 06 保存磁珠需要注意哪些问题？ 磁珠严禁冻结，这会降低磁珠的蛋白结合能力。磁珠置于常温，性能影响不大，但需及时放回4℃。 磁珠及相关产品目录 货号 名称 规格 价格 YJ001 Protein A磁珠 1mL 748元 YJ002 Protein G磁珠 1mL 748元 YJ003 Protein A/G磁珠 1mL 748元 YJ004 Protein L磁珠 1mL 1128元 YJ005 Anti-HA免疫磁珠 1mL 1838元 YJ006 Anti-Myc免疫磁珠 1mL 1838元 YJ007 Anti-Flag免疫磁珠 1mL 1838元 YJ008 Anti-GST免疫磁珠 1mL 1838元 YJ009 Anti-His免疫磁珠 1mL 1838元 YJ010 Anti-GFP免疫磁珠 1mL 1838元 YJ011 链霉亲和素磁珠 1mL 1128元 YJ012 伴刀豆球蛋白 A(ConA)磁珠 1mL 748元 YJ101 Protein A琼脂糖磁珠 1mL×2 1138元 YJ102 Protein G琼脂糖磁珠 1mL×2 1138元 YJ103 Protein A/G琼脂糖磁珠 1mL×2 1138元 YJ104 His标签蛋白纯化琼脂糖凝胶 1mL×10 568元 YJ105 GST标签蛋白纯化琼脂糖凝胶 1mL×10 848元 YJ106 His标签蛋白纯化琼脂糖磁珠 1mL×5 918元 YJ107 GST标签蛋白纯化琼脂糖磁珠 1mL×5 918元 YJ108 Anti-Flag免疫凝胶 1mL 1838元 YJ201 经典Protein A/G免疫（共）沉淀试剂盒 ≥40次 1198元 YJ202 基础免疫（共）沉淀试剂盒（无磁珠） ≥40次 598元 YJ203 经典Protein A免疫（共）沉淀试剂盒 ≥40次 1198元 YJ204 经典Protein G免疫（共）沉淀试剂盒 ≥40次 1198元 YJ205 HA免疫（共）沉淀试剂盒 ≥40次 2198元 YJ206 Myc免疫（共）沉淀试剂盒 ≥40次 2198元 YJ207 Flag免疫（共）沉淀试剂盒 ≥40次 2198元 YJ208 Flag免疫（共）沉淀试剂盒（凝胶） ≥40次 2198元 YJ209 GST免疫（共）沉淀试剂盒 ≥40次 2198元 YJ210 His免疫（共）沉淀试剂盒 ≥40次 2198元 YJ211 GFP免疫（共）沉淀试剂盒 ≥40次 2198元 拜尔迪生物是雅酶的授权特约经销商， 更多产品请咨询： 北京拜尔迪生物技术有限公司 咨询热线：010-62960866
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